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當(dāng)前位置:首頁產(chǎn)品中心細(xì)胞生物學(xué)支原體檢測與祛除AC16L061Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))

Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))

產(chǎn)品簡介

Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))是專門用于快速檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清或別的液體樣品(如血清)中是否存在支原體污染的試劑。操作簡單,檢測范圍廣,反應(yīng)時(shí)間短,只需吸取1 μl細(xì)胞培養(yǎng)上清加入反應(yīng)體系中,60℃孵育1h,肉眼觀察即可判定結(jié)果,與傳統(tǒng)檢測支原體的PCR法優(yōu)勢明顯。

產(chǎn)品型號:AC16L061
更新時(shí)間:2025-06-08
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
訪問量:4331
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品牌其他品牌CAS/
分子式/純度/
分子量/貨號AC16L061
規(guī)格50T供貨周期現(xiàn)貨
主要用途用于快速檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清或別的液體樣品(如血清)中是否存在支原體污染的試劑。應(yīng)用領(lǐng)域生物產(chǎn)業(yè)

產(chǎn)品描述
  Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng))是專門用于快速檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清或別的液體樣品(如血清)中是否存在支原體污染的試劑。本試劑盒操作簡單,反應(yīng)時(shí)間短,只需吸取1 μl細(xì)胞培養(yǎng)上清加入反應(yīng)體系中,60℃孵育1h,肉眼觀察即可判定結(jié)果,與傳統(tǒng)檢測支原體的PCR法優(yōu)勢明顯。本試劑盒檢測范圍廣,可以檢測:(1)M.Hyorhinis、(2)M.Fermentans、(3)M.Arginini、(4)M. hominis、(5)M. orale、(6)M. salivarium、(7)M.pirum、(8)Acholeplasma Laidlawii、(9)M. agalactiae、(10)M.bovis、(11)M. buccale、(12)M. arthritidis、(13)M. pulmonis等幾乎所有常見的污染細(xì)胞的支原體(M.Mycoplasma的縮寫)。以上13種支原體約占細(xì)胞支原體污染的99%以上。絕大多數(shù)支原體污染集中于前8種。因此非常適合于與細(xì)胞生物學(xué)相關(guān)的科研實(shí)驗(yàn)室及企業(yè)的日常支原體檢測。
快速法不能檢測尿解,肺支原體
訂購信息

產(chǎn)品名稱 貨號 規(guī)格 價(jià)格
Quick Cell支原體快速檢測試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng)) AC16L061 50T 1350

產(chǎn)品組分

產(chǎn)品組分 規(guī)格
溶液 1075 μL (50次檢測)
溶液Ⅱ 55 μL(50次檢測)
溶液Ⅲ 指示劑,38 μL(50次檢測)
陽性支原體DNA 50 μL
礦物油 1500 μL

【注】:①本試劑盒所指50次測試包含陰性對照、陽性對照,并非50個(gè)樣品,因每次測試均需設(shè)置對照,測試樣品數(shù)根據(jù)實(shí)驗(yàn)安排確定,理論上一次最多可測試48個(gè)樣品。②使用前用離心機(jī)輕微離心,以免管壁上粘附損失試劑減少檢測次數(shù)。 (注:陽性支原體DNA無需離心。)
運(yùn)輸與保存
藍(lán)冰運(yùn)輸-20℃保存,有效期36個(gè)月
實(shí)驗(yàn)操作流程
1.待測細(xì)胞培養(yǎng)上清收集
為了準(zhǔn)確判斷細(xì)胞是否有支原體的污染,待測的細(xì)胞培養(yǎng)液樣品最好來源于至少培養(yǎng)3 d且匯合度70-90%左右的細(xì)胞培養(yǎng)上清(貼壁細(xì)胞)。懸浮培養(yǎng)的細(xì)胞也需要在換液傳代后,至少讓細(xì)胞生長3 d再取培養(yǎng)液進(jìn)行檢測,哺乳動(dòng)物細(xì)胞的存在不會影響檢測結(jié)果。細(xì)胞培養(yǎng)上清可直接用于檢測,但樣品中如果含有EDTA等影響支原體DNA擴(kuò)增的成分,建議進(jìn)行樣品處理,處理過程如下:
樣品處理:(1)根據(jù)濃縮倍數(shù),可以取100-1500μL上述待測樣品到1.5 mL離心管內(nèi),在普通臺式離心機(jī)上1000 rpm低速離心5 min,將離心后的上清轉(zhuǎn)移到另一個(gè)離心管內(nèi),丟棄細(xì)胞沉淀。(2)將上清繼續(xù)13000 rpm(約 16000 g)高速離心 5 min,小心吸走全部上清,用 50 μL 5 mM Tris-HCl, pH 8.5(樣品可以長期保存。推薦)或者去離子水重懸沉淀(沉淀中含有支原體),吹吸均勻(如果最初使用了1500 μL 的樣品,則支原體濃度大約提高了30倍)。(3)該重懸后的樣品可以直接檢測,也可以進(jìn)行熱處理后再檢測(熱處理后,樣品保存更穩(wěn)定)。熱處理過程:95 ℃加熱處理 5 min(可以轉(zhuǎn)移到 PCR 管內(nèi),在 PCR 儀上進(jìn)行加熱處理),簡單離心(1000 g,5 sec)后,取上清進(jìn)行檢測。
【注】:收集的待測細(xì)胞培養(yǎng)液樣品如果不立即檢測,請放于-20℃或-80℃冰箱保存,不得放于室溫或4℃冰箱。樣品在-20℃至少可以保存1個(gè)月,在-80℃可以長期保存。此外,為了節(jié)約檢測成本,可以將不同時(shí)間收集的樣品放于-20℃或-80℃冰箱保存,而后一起檢測。
2.反應(yīng)體系的配制
表1:恒溫反應(yīng)體系的配制

組份 單個(gè)樣品用量(μL 樣品總數(shù) N個(gè)樣品用量(μL
溶液 21.5 N 21.5×N×1.06
溶液 1 N 1×N×1.06
溶液 0.5 N 0.5×N×1.06


(1)將溶液Ⅰ、溶液Ⅲ從-20℃冰箱中取出,室溫放置待其融化,溶液Ⅱ從-20℃冰箱中取出后置于冰上備用。溶液Ⅱ、Ⅲ使用前各需1000rpm離心30 sec,用移液槍吹洗均勻。三種試劑按表1比例混合。
【舉例】:①如果待測樣品為8個(gè)(加上1個(gè)陰性和1個(gè)陽性對照),則樣品總數(shù)為10個(gè)。溶液的總體積為22.5×10×1.06=238.50 μL。溶液Ⅱ的總體積為1×10×1.06=10.60 μL。溶液Ⅲ的總體積為0.5×10×1.06=5.3 μL。將溶液、溶液Ⅱ和溶液Ⅲ混合均勻即可。②如果打算一個(gè)試劑盒一次使用完畢,可以按照以下方法進(jìn)行配制:直接往整管溶液(1150 μL)中加入50 μL 溶液Ⅱ和25 μL溶液Ⅲ,混合均勻即可。如果一次使用完畢,一個(gè)試劑盒大概可以檢測48-49個(gè)樣品。
【注】:①總體積中多配制6%(如果覺得該比例不合適,可以自己調(diào)整),是為了防止移液誤差,以保證每個(gè)反應(yīng)管中的反應(yīng)液足量溶液和溶液Ⅲ使用完后,請繼續(xù)放回-20 ℃冰箱中保存溶液Ⅱ必須一直在-20 ℃冰箱中保存溶液Ⅱ在-20 ℃不會凍住,不能放于室溫。④溶液Ⅱ和溶液Ⅲ開蓋之前,請離心一下。

(2)將上述配制好的反應(yīng)體系,吹打均勻后,按每管24 μL分裝到0.2 mL的PCR管中。盡量保證每管的反應(yīng)液體積一樣。PCR管應(yīng)該使用透明度良好的薄壁PCR管。
(3)往測試管(Test)中加入1μL待測細(xì)胞培養(yǎng)液;往陽性對照管(Positive)中加入1 μL陽性支原體DNA;往陰性對照管(Negative)中加入1μL滅菌水;反應(yīng)液的總體積為25 μL。
【注】:①裝有陽性支原體DNA的螺口管開蓋之前,用力甩一下,或者用迷你離心機(jī)即可。
②進(jìn)行反應(yīng)體系配制的房間,與進(jìn)行樣品前處理、加陽性對照DNA、樣品DNA的房間最好分開。

 

3. 反應(yīng)
PCR儀設(shè)置程序:61℃,60 min;10℃forever;熱蓋溫度,105℃。
【注】:若實(shí)驗(yàn)室反應(yīng)場所沒有PCR儀,可用水浴鍋代替,水浴鍋顯示溫度與實(shí)際溫度的溫差不超過0.5℃,另須往每個(gè)反應(yīng)管內(nèi)加入25μL礦物油,以防止水份揮發(fā),然后蓋上蓋子,將反應(yīng)管插入帶孔的漂板內(nèi),放入已經(jīng)升溫到61℃的水浴內(nèi),準(zhǔn)確反應(yīng)60 min。
4. 結(jié)果判斷
61℃反應(yīng)60 min后,立刻取出反應(yīng)管,放于室溫。以一張白紙或白色泡沫盒為背景,通過反應(yīng)管溶液顏色的變化,即可判斷檢測結(jié)果。如果溶液為藍(lán)綠色,則說明有支原體污染;如果為紫紅色,則說明沒有支原體污染(如圖1)。
【注】:如果反應(yīng)60 min,陽性對照效果不明顯,可以繼續(xù)反應(yīng)10 min。

               

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產(chǎn)品圖片

注意事項(xiàng)
1.該產(chǎn)品僅限于科學(xué)實(shí)驗(yàn)研究使用,不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域。
2.必須確保使用的移液槍本身沒有殘留的支原體,盡量用新購移液器、新開封的槍頭操作。整個(gè)操作過程,佩戴kouzhao不要開口說話。由于本試劑盒非常靈敏,移液槍如吸附有,或者人為帶入支原體均有可能造成假陽性。
3.最好使用帶濾芯的吸頭吸取溶液和陽性支原體等。如果沒有帶濾芯的吸頭,至少應(yīng)該使用新開封的吸頭。
4.檢測過程中,用過的各類吸頭、離心管務(wù)必小心處理,應(yīng)裝入含有半瓶水的帶蓋的、可密封的垃圾瓶內(nèi)。反應(yīng)后的PCR管,不要開蓋,用過后將其用自封閉,扔到遠(yuǎn)離細(xì)胞房的獨(dú)立垃圾桶內(nèi)。
5.如果細(xì)胞被支原體污染,可以選購本公司或其他供應(yīng)商提供的去除試劑盡早去除。
6.如待測樣品是低溫保存的血漿、血清、臍帶血、胰酶、抗生素、未使用的培養(yǎng)液等,這類樣品中支原體含量較低,為了保證支原體DNA的檢出率,可通過離心濃縮提高樣品DNA濃度,再進(jìn)行檢測。

7.如果反應(yīng)后,發(fā)現(xiàn)個(gè)別樣品的顏色介于陽性和陰性之間(正常這種情況應(yīng)該概率很低,如果經(jīng)常出現(xiàn),樣品中可能含有可干擾正常指示效果的物質(zhì),必須先去除。),可以將這些樣品繼續(xù) 61℃反應(yīng) 10  min。10  min后,如果其顏色仍然與陽性對照的顏色不同,該樣品應(yīng)該判為陰性。這種可疑樣品建議用相同試劑盒或者不同原理的其他試劑盒(如本公司的《PCR 法支原體檢測試劑盒》貨號:AC16L064、《發(fā)光法支原體檢測試劑盒》貨號:AC16L062 、《探針法支原體檢測試劑盒》貨號:AC16L068)進(jìn)行復(fù)檢。
8.反應(yīng)后,請勿打開反應(yīng)管的蓋子,否則有可能造成檢測環(huán)境的污染。
表2:Quick Cell 支原體快速檢測試劑盒(細(xì)胞培養(yǎng)專用)的優(yōu)勢

 

比較內(nèi)容 檢測支原體PCR法 Quick Cell 快速支原體檢測試劑盒
操作時(shí)間 3 h 1 h
是否需要樣品處理 樣品需預(yù)處理,DNA提取 無需樣品處理,直接使用上清
靈敏度 靈敏度低 PCR法提高100-1000
是否需要電泳 需要電泳及染色 不需電泳,肉眼觀察結(jié)果

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