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瓊脂糖凝膠與核酸電泳小知識(shí)分享
2023-03-20
影響核酸電泳遷移率的幾個(gè)因素1、核酸分子大小在一定濃度的瓊脂糖凝膠中，DNA片段遷移距離和其含有的堿基對(duì)數(shù)量成反比，因此可以通過(guò)與標(biāo)準(zhǔn)條帶遷移距離進(jìn)行比較，由此得出目的條帶的大小，但這僅對(duì)雙鏈線性的DNA比較準(zhǔn)確(DNAMarker一般為雙鏈線狀DNA)，且對(duì)大于20kb的DNA不適用(普通瓊脂糖凝膠很難將其分開(kāi))。2、核酸分子構(gòu)象DNA分子在電場(chǎng)中的遷移速度不僅和分子量有關(guān)，還和它本身的構(gòu)象有關(guān)。相同分子量的線狀、開(kāi)環(huán)和超螺旋DNA在瓊脂糖凝膠中的移動(dòng)速度不一樣，移動(dòng)速度次...
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簡(jiǎn)單介紹PEI轉(zhuǎn)染試劑的保存方法
2023-03-15
一、PEI轉(zhuǎn)染試劑的作用PEI轉(zhuǎn)染試劑，全稱聚乙烯亞胺（polyethylenimine），是一種常見(jiàn)的DNA、RNA質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑。PEI會(huì)與DNA形成一種復(fù)合物，并將DNA導(dǎo)入人體細(xì)胞內(nèi)，使其表達(dá)您需要的蛋白質(zhì)。二、PEI轉(zhuǎn)染試劑的原理PEI轉(zhuǎn)染試劑的原理是利用PEI分子所帶上的各種官能團(tuán)對(duì)DNA或RNA質(zhì)粒進(jìn)行吸附，形成一個(gè)復(fù)合物，再將該復(fù)合物轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)，使DNA或RNA質(zhì)粒得以進(jìn)入細(xì)胞，并在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行表達(dá)。而PEI分子帶上的陽(yáng)離子基團(tuán)能夠與細(xì)胞的負(fù)電荷相結(jié)合，從而達(dá)到...
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高保真DNA聚合酶的操作方法介紹
2023-03-09
高保真DNA聚合酶是一種具有高準(zhǔn)確性和高速度的酶，廣泛應(yīng)用于PCR擴(kuò)增、突變篩選、基因克隆、DNA測(cè)序等領(lǐng)域。其在基因工程和生物技術(shù)研究中有著十分重要的作用。作用原理：高保真DNA聚合酶可將DNA單鏈合成DNA雙鏈，并對(duì)DNA進(jìn)行擴(kuò)增。該酶的作用機(jī)理基于DNA聚合酶基本的催化反應(yīng)機(jī)制：利用DNA單鏈為模板，在DNA聚合酶的作用下，引物與模板互補(bǔ)結(jié)合進(jìn)行DNA聚合反應(yīng)。高保真DNA聚合酶的主要特點(diǎn)是：具有一定的3’-5’外切活性，能修正因PCR擴(kuò)增引入的多種誤差，如插入、缺失、...
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DNA聚合酶和RNA聚合酶的異同點(diǎn)
2023-02-22
DNA聚合酶是細(xì)胞復(fù)制DNA的重要作用酶，目前為止已發(fā)現(xiàn)有5種DNA聚合酶，分別為DNA聚合酶Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ，都與DNA鏈的延長(zhǎng)有關(guān)。DNA聚合酶RNA聚合酶的相同點(diǎn)：都能以DNA為模板，從5'向3'進(jìn)行核苷酸或脫氧核苷酸的聚合反應(yīng)。DNA聚合酶RNA聚合酶的不同點(diǎn)：1、作用底物不同。RNA聚合酶底物是NTP；DNA聚合酶底物是dNTP。2、RNA聚合酶作用不需要引物，而DNA聚合酶作用需要引物。3、RNA聚合酶本身具有一定的解旋功能，而DNA聚合酶沒(méi)有，當(dāng)需要解開(kāi)雙鏈的...
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細(xì)胞凍存和細(xì)胞凍存步驟
2023-01-16
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而細(xì)胞凍存步驟及細(xì)胞凍存液的選擇也是影響細(xì)胞凍存效率及解凍復(fù)蘇后細(xì)胞活力的主要條件。下面就以細(xì)胞凍存液為例講解細(xì)胞凍存原理及細(xì)胞凍存的步驟。細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融，實(shí)驗(yàn)證明這樣可以最大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑，這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性，加上緩慢冷凍可使...
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慢病毒的感染效率受哪些因素影響？
2023-01-06
慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對(duì)稱結(jié)構(gòu)、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細(xì)胞的類型)，再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼，最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶)。慢病毒感染的顯著特點(diǎn)是感染個(gè)體在出現(xiàn)典型的臨床癥狀之前，大多經(jīng)歷長(zhǎng)達(dá)數(shù)年的潛伏期，之后緩慢發(fā)病，因此這些病原體被稱為慢病毒。慢病毒包裝系統(tǒng)一般由慢病毒表達(dá)載體和慢病毒包裝載體組成。而慢病毒包裝質(zhì)粒可提供所有的轉(zhuǎn)錄并包裝RNA到重組的慢病毒載體所需要的所...
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細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種技術(shù)
2022-12-31
細(xì)胞轉(zhuǎn)染是將外源性基因?qū)爰?xì)胞內(nèi)的一種專門技術(shù)。隨著基因與蛋白功能研究的深入，轉(zhuǎn)染目前已成為實(shí)驗(yàn)室工作中經(jīng)常涉及的基本方法。常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中,因此一個(gè)宿主細(xì)胞中可存在多個(gè)拷貝數(shù),產(chǎn)生高水平的表達(dá),但通常只持續(xù)幾天,多用于啟動(dòng)子和其它調(diào)控元件的分析。一般來(lái)說(shuō)，超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染效率較高，在轉(zhuǎn)染后24-72小時(shí)內(nèi)（依賴于各種不同的構(gòu)建）分析結(jié)果，常常用到一些報(bào)告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來(lái)幫...
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溶酶體是細(xì)胞內(nèi)的消化器官
2022-12-21
溶酶體（Lysosomes）是動(dòng)物細(xì)胞中重要的細(xì)胞器,其存在的完整性與動(dòng)物生理病理均密切相關(guān)。溶酶體是真核細(xì)胞中為單層膜所包圍的細(xì)胞質(zhì)結(jié)構(gòu)，內(nèi)部pH4～5，含豐富的水解酶，具有細(xì)胞內(nèi)的消化功能。新形成的初級(jí)溶酶體經(jīng)過(guò)與多種其他結(jié)構(gòu)反復(fù)融合，形成具有多種形態(tài)的有膜小泡，并對(duì)包裹在其中的分子進(jìn)行消化。因此，溶酶體具有溶解或消化的功能，為細(xì)胞內(nèi)的消化器官。溶酶體染色試劑盒可以標(biāo)記活細(xì)胞中的溶酶體，使之帶綠色熒光(Ex/Em=405/505nm)。本試劑盒使用染料為一種疏水性復(fù)合物，...
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