Blasticidin S HCl (滅瘟素S)是來源于灰色鏈霉菌(Streptomyces griseochromogenes)的一種核苷類抗生素，中文名為滅瘟素S、殺稻瘟菌素S或稻瘟散，一般為鹽酸鹽。

Blasticidin S常用于篩選攜帶bsr/BSD/bls基因(常標記為bsrr/bsdr/Blastr)質(zhì)粒的哺乳動物穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞株，具有快速而強效的作用模式，很低的抗生素濃度便能使未攜帶抗性基因的細胞迅速死亡。

本產(chǎn)品10mg/ml包裝配制在HEPES (pH7.4)緩沖溶液中，濃度為10mg/ml，經(jīng)0.22μm濾膜過濾除菌，可以直接用于細胞培養(yǎng)。本產(chǎn)品10mg和50mg包裝為粉末裝。

Blasticidin S通過干擾核糖體結(jié)合肽段而特異性抑制原核細胞或真核細胞的蛋白合成。目前已經(jīng)有3種滅瘟素耐受基因，一種是分離自鏈霉菌(Streptoverticillum sp.)的乙酰基轉(zhuǎn)移酶基因bls；另外兩種是脫氨酶基因，分別是從蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)中分離的bsr和從土霉菌(Aspergillus terreus)中分離的BSD基因。bsr和BSD基因是zui常用的篩選標志，用于哺乳動物和植物細胞的穩(wěn)定細胞株篩選。Blasticidin S也可用于大腸桿菌(E. coli)等原核細胞的篩選。

Blasticidin S具有快速而強效的作用模式，在很低的抗生素濃度下便能導致細胞快速死亡。大腸桿菌通常對50μg/ml的濃度敏感，而哺乳動物細胞對低至2-10µg/ml的濃度敏感。細胞死亡迅速發(fā)生，通常可在不到一周的時間內(nèi)即可形成具有Blasticidin S抗性的穩(wěn)定哺乳動物細胞系。

訂購信息

常溫運輸。4℃保存，有效期36個月。

技術(shù)參數(shù)

1.CAS：3513-03-9

2.分子式：C17H26N8O5·HCl

3.分子量：458.9

4.純度：>95%

5.結(jié)構(gòu)式：

使用方法

1.推薦工作濃度

推薦的作用于哺乳動物細胞的Blasticidin S濃度一般為1-50μg/ml，但最佳工作濃度需要通過劑量反應曲線來確定。

表1.部分常見哺乳動物細胞的推薦工作濃度表

2.Blasticidin S劑量反應曲線的確定
　　Blasticidin S的有效篩選濃度與細胞類型、生長狀態(tài)、細胞密度、細胞代謝及細胞所處細胞周期等因素相關(guān)。為了篩選到具有Blasticidin S抗性的穩(wěn)定細胞株，需要確定殺死未轉(zhuǎn)染/感染宿主細胞所需的Blasticidin S的zui低濃度，可以通過實驗來確定適合自身實驗體系的劑量反應曲線(dose-response curve or kill curve)。
（1）第一天：將正常的細胞按照約25%的密度接種在適宜的細胞培養(yǎng)板上，于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。
（2）第二天：將培養(yǎng)過夜的細胞培養(yǎng)基換成新鮮的含不同濃度Blasticidin S的篩選用培養(yǎng)基，Blasticidin S濃度可以設置為0、2、4、6、8和10μg/ml等，每個濃度設置2個復孔，于細胞培養(yǎng)箱內(nèi)繼續(xù)培養(yǎng)。注：也可以根據(jù)自己的實驗體系，設置不同的濃度梯度。
（3）每3-4 d更換新鮮的篩選培養(yǎng)基，并觀察存活細胞的比例。
（4）選擇在加入Blasticidin S后7-10天殺死大多數(shù)細胞的zui低濃度為最佳篩選濃度。
3.哺乳動物穩(wěn)定表達細胞株的篩選
　　轉(zhuǎn)染含有bsr或BSD基因的質(zhì)粒或者感染含有該基因的病毒后，即可篩選穩(wěn)定表達株。
（1）細胞轉(zhuǎn)染或感染48h后，將細胞置于含有適當濃度Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，此為處理組。
【注】：當細胞處于分裂活躍期時，抗生素作用zui明顯。細胞過于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會明顯下降，所以細胞的密度最好不超過25%。建議同時做一個正常細胞的對照組。轉(zhuǎn)染或感染48 h后，如果細胞過密也可以消化后重新接種細胞，培養(yǎng)過夜后即可進行Blasticidin S篩選。
（2）每3-4 d去除培養(yǎng)基，加入含Blasticidin S的新鮮培養(yǎng)基。

（3）篩選7-10 d后，對照組正常細胞應該100%死亡，處理組中存活的細胞為表達bsr或BSD基因的細胞。然后根據(jù)實驗目的進行多克隆或單克隆細胞的篩選。根據(jù)宿主細胞種類和轉(zhuǎn)染/篩選效率，集落形成可能需要一周或更多的時間。
（4）克隆形成后，挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆到35mm細胞培養(yǎng)板中，加入選擇培養(yǎng)基維持培養(yǎng)7 d。隨后用細胞毒性實驗進行檢測。

注意事項

1.本產(chǎn)品僅限于科學實驗研究使用，不得用于臨床診斷、治療等領(lǐng)域

2.用于細胞實驗，溶解后，須用一次性針頭濾器過濾除菌。

3.抗生素不穩(wěn)定，請在有效期內(nèi)盡快使用。

4.以上數(shù)據(jù)均來自公開文獻, 李記生物暫未本產(chǎn)品進行獨立驗證, 僅供參考。

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