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BCA蛋白定量試劑盒有什么作用(附帶產品說明書)

更新時間:2025-01-10點擊次數:1013

BCA (Bicinchoninic acid) 法是目前應用比較廣泛的蛋白質濃度測定方法。基于雙縮脲反應,即在堿性環境下蛋白質將Cu2+還原成Cu+,Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物,在562 nm處有高的吸光值,該反應產物的量與蛋白質濃度成正比。測定其在562 nm處的吸光值,并與標準曲線對比,即可計算待測蛋白的濃度。該方法快速靈敏、穩定可靠且對不同種類蛋白質變異系數很小。試劑盒中提供了濃度穩定的蛋白標準品用于制作標準曲線。

BCA蛋白定量試劑盒產品作用
準確靈敏,線性范圍廣:BCA 試劑的蛋白質測定范圍是 10-2000μg/mL。

快速:45 分鐘內完成測定,比經典的 Lowry 法快 4 倍而且更加方便。  

經濟實用:在微孔板中進行測定,可大大節約樣品和試劑用量。  

效果穩定:不受樣品中離子型和非離子型去污劑影響,檢測不同蛋白質分子的變異系數遠小于考馬斯亮藍。

BCA蛋白定量試劑盒使用說明

一、配制標準品和工作液

1. 配制 BSA 標準品體系(線性范圍 20-2000 μg/mL 或者 5-250μg /mL 標準品制備各 2 種配置方法,請根

據習慣選用恰當方式)。

2. 配制 BCA 工作液

(1) 計算所需要的總 BCA 工作液體積。總 BCA 工作液體積=(標準品數量+待測樣品數量)x 重復數 x 每個

樣品所需要的 BCA 工作液。

(2) 配制 BCA 工作液:50 體積的 BCA 試劑 A 中加入 1 體積的 BCA 試劑 B(A:B=50:1),充分混勻。

二、檢測方法

1. 試管檢測方法(樣品:BCA 工作液=1:20)

(1) 各取 100 μL 標準品和待測樣品加入到反應管中。

(2) 每管加入 2.0 mL BCA 工作液,混勻。根據待測樣品的濃度范圍選擇孵育時間和溫度。

標準孵育方法:37℃ 孵育 30 min 或者室溫 2h(檢測范圍:20-2000 μg/mL)

增強孵育方法:60℃ 孵育 30 min(檢測范圍:5-250 μg/mL)

(3) 冷卻到室溫。在分光光度計上進行檢測,設定波長為 562 nm,在 10 min 內對所有樣品讀數。

(4) 根據 BSA 標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的 OD 值即最終的讀數),繪制標準曲線(X-蛋白濃

度μg/mL;Y-最終的 OD 562nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。

2. 微孔板檢測方法(樣品: BCA 工作液=1:20)

(1) 各取 10 μL 標準品和待測樣品加入到微孔板中。

(2) 每孔加入 200 μL BCA 工作液,槍頭吹打充分混勻。蓋上微孔板,37℃ 孵育 30 min。

(3) 冷卻到室溫,在酶標儀上的 562 nm 波長范圍處檢測吸光度。

(4) 根據 BSA 標準品的吸光度(減去標準品中空白孔的 OD 值即最終的讀數),繪制標準曲線( X-蛋白濃

度μg/mL;Y-最終的 OD 562nm)。依據標準曲線和樣品的稀釋倍數計算樣品蛋白濃度。

BCA蛋白定量試劑盒注意事項

1、為保證蛋白濃度測量的準確性,最好做3個復孔,必要時剔除離群值。

2、BCA法測蛋白濃度易受時間及溫度的影響,所以最好每次測定都做標準曲線。

3、加樣時一定要準確加樣且盡可能避免氣泡產生,以免影響測量(加樣結束可以用注射器戳破氣泡,并將96孔板放在搖床上混勻片刻,以使樣品與工作液充分接觸)。

4、孵育結束應盡快檢測吸光度,并盡可能加快檢測速度,以免帶來誤差。

5、確保所有試劑在使用前充分混合且在推薦的溫度下存儲。試劑的新鮮度對實驗結果有顯著影響,過期或不當存儲的試劑可能導致不準確的結果。

6、在進行BCA實驗時,嚴格按照試劑添加順序和操作步驟進行,避免任何步驟的顛倒或省略。


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